生化危机系列游戏的主角包括：
克里斯·雷德菲尔德 （Chris Redfield）
登场作品：
生化危机1、生化危机4、生化危机5、生化危机6、生化危机7
特点：勇敢、机智，是玩家心中的英雄。
里昂·斯科特·肯尼迪 （Leon Scott Kennedy）
登场作品：
生化危机2、生化危机4、生化危机6、生化危机：恶化、生化危机：复仇、生化危机：黑暗历代记、生化危机：浣熊市行动
特点：异性缘好，运气不佳，是系列中异性缘极好的角色。
吉尔·瓦伦蒂安 （Jill Valentine）
登场作品：
生化危机1、生化危机2、生化危机5、生化危机：安布雷拉历代记、生化危机：代号维罗妮卡、生化危机：启示录、生化危机：雇佣兵3D
特点：前浣熊市警局特殊部队S.T.A.R.S队员，现为反生化武器组织BSAA的队员。
克莱尔·雷德菲尔德 （Claire Redfield）
登场作品：
生化危机2、生化危机3、生化危机4、生化危机5、生化危机6
特点：非政府组织谛拉席芙（TerraSave）的成员，性格坚强。
瑞贝卡·查姆博斯 （Rebecca Chambers）
登场作品：
生化危机0、生化危机1、生化危机安布雷拉历代记、生化危机：死寂
特点：前S.T.A.R.S队员，天才化学少女，性格活泼开朗。
比利·科恩 （Billy Coen）
登场作品：
生化危机0、生化危机安布雷拉历代记
特点：前海军少尉，因虐杀罪名被判死刑，后与瑞贝卡成为同伴。
游戏《生化危机9》将采用多主角设定，包括里昂、克里斯、吉尔等经典角色回归，并引入新角色。玩家在游戏中可以操控不同的主角进行战斗
